التحقق من فعالية التعقيم من Autoclaves

واحدة من أهم الأدوات في مختبر علم الأحياء الدقيقة هي المعقم ، حيث يكون الأوتوكلاف (معقم البخار عالي الضغط) هو الأكثر استخدامًا. وفقًا لـ GB 4789.1-2016 ، يجب فحص معدات المختبر و/أو معاييرها بانتظام (مع علامات التفتيش) ، والحفاظ عليها ، وخدمة لضمان الأداء السليم والسلامة التشغيلية. ولكن هل خضعت AutoClave الخاصة بك في عمليات التفتيش؟ وإذا كنت ترغب في أداء التحقق ، فكيف يجب أن تفعل ذلك؟ اليوم ، سنلخص الأساليب الرئيسية للتحقق من فعالية التعقيم للعلماء التلقائي.

يتضمن التحقق من فعالية تعقيم الأوتوكلاف عمومًا طرقًا مثل المؤشر الكيميائي ، وأقصى مقياس حرارة ، وأنبوب درجة الحرارة ذاتيًا ، والمؤشر البيولوجي. على الرغم من أن هذه الأساليب تشترك في مبادئ مماثلة - تؤكد تمامًا ما إذا كان المعقم يصل إلى درجة الحرارة المطلوبة أثناء التعقيم - يمكنك اختيار واحد أو أكثر بناءً على الظروف المحددة لمختبرك.

1. طريقة المؤشر الكيميائي

المبدأ: تخضع المؤشرات الكيميائية لتغيير اللون أو الشكل في ظل درجة حرارة وظروف زمنية محددة. يتم استخدام هذا التغيير لتحديد ما إذا كانت معلمات التعقيم قد تم استيفاءها.

عنصر شائع الاستخدام في المختبرات هو شريط مؤشر الأوتوكلاف 3M ، والذي يغير اللون بعد التعقيم. يتكون الشريط من المواد الكيميائية الحساسة للحرارة ، ومطوري الألوان ، ومواد الطلاء ، المطبوعة بنمط شريط على شريط لاصق. يتم تطبيقه مباشرة على الجزء الخارجي من حزمة التعقيم ، مع الحد الأدنى طول 5 سم. اضغط على الشريط بخفة لضمان التصاق جيد وختم. بعد تعرضه لـ 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة أو 130 درجة مئوية لمدة 4 دقائق ، يجب أن تتحول الخطوط البيضاء القطرية على الشريط بالكامل. إذا كان تغيير اللون غير متساوٍ أو غير مكتمل ، فسيتم اعتبار الحزمة غير معقمة بشكل صحيح.

2. طريقة مقياس الحرارة القصوى

المبدأ: تستخدم هذه الطريقة مقياس حرارة الزئبق لا يعود إلى درجة حرارة أقل بمجرد تسخينه ، على غرار مقياس الحرارة الطبي التقليدي. ويشير إلى الحد الأقصى لدرجة الحرارة التي تم الوصول إليها أثناء التعقيم.

للتحقق ، ضع مقياس حرارة الزئبق داخل قارورة Erlenmeyer المليئة بالماء. أثناء التعقيم ، ضع القارورة في الأقسام العلوية والسفلية من الأوتوكلاف. بعد العملية ، تحقق مما إذا كانت قراءة مقياس الحرارة تتطابق مع درجة الحرارة المطلوبة. يمكن أن تتحقق هذه الطريقة من درجة الحرارة فقط ولا يمكنها تأكيد ما إذا كان قد تم استيفاء متطلبات وقت التعقيم ، لذلك فهي تمثل الحد الأدنى لمعايير التحقق التلقائي.

3. طريقة أنبوب درجة الحرارة المصنوعة ذاتيا

المبدأ: تستخدم هذه الطريقة بعض المواد الكيميائية التي تذوب وتعيد التبلور في درجات حرارة محددة ، مع أشكال البلورة المميزة بعد التبريد. يتم إغلاق هذه المواد الكيميائية في أنابيب زجاجية صغيرة ووضعها داخل الأوتوكلاف. بعد التعقيم ، يتم فحص الشكل البلوري لتحديد ما إذا تم الوصول إلى درجة الحرارة الصحيحة.

يشيع استخدام حمض البنزويك ، مع نقطة انصهار تتراوح بين 121-123 درجة مئوية ، والتي تتماشى مع درجة حرارة التعقيم القياسية في الأوتوكلاف. حامض البنزويك الصلب مغلق في أنابيب زجاجية صغيرة ووضعها في الأوتوكلاف. بعد التعقيم ، لوحظ حالة حمض البنزويك لتأكيد ما إذا كانت درجة الحرارة المستهدفة قد تحققت. مثل طريقة مقياس الحرارة القصوى ، يتحقق هذا النهج فقط من درجة الحرارة ، وليس مدة التعقيم.

4. طريقة المؤشر البيولوجي

المبدأ: تستخدم هذه الطريقة جراثيم غير مجنونة من Geobacillus stearothermophilus ككائنات مؤشر لتقييم فعالية التعقيم الحراري. هذه الجراثيم مقاومة للغاية للحرارة ، مع مقاومة مماثلة لمقاومة جراثيم البوتولينوم الجذابة المسببة للأمراض ، مما يجعلها مؤشرات مناسبة للتحقق من فعالية التعقيم.

تتوفر المؤشرات البيولوجية بثلاثة أشكال: معلقات البوغ ، وشرائط البوغ ، وأنابيب البوغ والمتوسطة المتكاملة. يتم وضعها عادة في خمسة مواقع في حاوية التعقيم: الأمام والوسط والخلف للطبقة السفلية ، وكذلك نقاط الأوسط للطبقات العليا والمتوسطة. بعد التعقيم ، يتم تلقيح المؤشرات في ماء البروموكسول الأرجواني-الجلوكوز-بلوكوز وحضنت في 55-60 درجة مئوية لمدة 2-7 أيام. إذا ظلت الوسيلة واضحة وغير متغيرة في اللون ، فقد قتلت الجراثيم ، مما يشير إلى تعقيم جيد. إذا أصبحت الوسيلة صفراء وعربة ، فقد نجت الجراثيم ، مما يشير إلى ضعف أداء التعقيم. كل من المعلقات البوغ وشرائط البوغ تتبع نفس عملية التحقق من الصحة.

وتستخدم أنابيب المؤشرات البيولوجية التجارية عادة في المختبرات. أنها تحتوي على جراثيم Geobacillus stearothermophilus و ampoule الزجاجي المختومة مع وسط النمو. يتم وضع الأنابيب في جميع أنحاء حاوية التعقيم. بعد التعقيم التلقائي ، يتم سحق ampoule الزجاجي لإطلاق الوسط ، ويتم حضانة الأنبوب عند 56 درجة مئوية ، إلى جانب التحكم الإيجابي. إذا كان التعقيم غير كافٍ ، فسوف تنمو الجراثيم الباقية وتحول المرق الأصفر. إذا كان التعقيم فعالًا ، يتم تعطيل الجراثيم ، ويظل المرق أرجوانيًا.

تردد التحقق

حاليًا ، لا يوجد معيار وطني صارم فيما يتعلق بتكرار التحقق من فعالية الأوتوكلاف. من المتوقع أن تنشئ المختبرات جداول التحقق الخاصة بها والالتزام بها بدقة. بالنظر إلى كل من سهولة الاستخدام وموثوقية النتائج ، نوصي باستخدام شريط المؤشر بالاشتراك مع أنابيب المؤشرات البيولوجية ، لأنها توفر التشغيل البسيط والتحقق الشامل من فعالية التعقيم.

ملاحظات على التعقيم (غير مطلوب لبعض الأوتوكلات التلقائية التلقائية المستوردة بالكامل)
عند استخدام معقم البخار عالي الضغط ، من الأهمية بمكان طرد جميع الهواء البارد داخل الغرفة عند إطلاق البخار. فقط بعد إزالة كل الهواء البارد في حالة إغلاق صمام العادم. إذا بقي أي هواء ، فقد يشير مقياس الضغط إلى الضغط الصحيح ، لكن درجة الحرارة الفعلية داخل الغرفة ستنخفض. كلما تم الاحتفاظ به ، زاد التناقض بين الضغط ودرجة الحرارة ، مما قد يؤدي إلى تعقيم غير مكتمل. (تتم ملاحظة ذلك غالبًا أثناء تعقيم وسائط التخمير ، حيث تظل فقاعات الهواء في أنابيب دليل صغيرة - حاول استنفاد الهواء البارد بشكل أكثر شمولية.)